10月8日，清朝钦差大臣耆英、英国驻华全权公使璞鼎查各自代表两国政府在广东虎门签订《五口通商附粘善后条款》，作为南京条约补充条款，通称《虎门条约》。附有《小船定例》三未。《虎门条约》共十六款，主要内容有：准许英人在五口租地建屋，永久居住；英国取得片面的最惠国待遇，中国给予其他国家任何权利，英国可以"一体均沾"。
中英《虎门条约》共16条，另附“小船定例”3条；其附件《五口通商章程：海关税则》共15款，另将两国贸易中的26类货物的关税作了具体的规定。这使得中国的主权受到了严重的损害。中国丧失了下列重要权利：
1．关税自主权。双方将海关税则以两国协定的方式规定下来，清朝政府也就从此承担了相应的条约义务，从而在实际上丧失了单独改变税率的权力。
2．对英人的司法审判权。条约规定，遇有交涉词讼，由英领事与中国官员会同查明其事；其英人如何处置，由英国议定章程、法律，发给领事官照办。这就将在华英人完全置于中国法律体系之外，置于中国司法审判权之外了。
3．片面最惠国待遇。条约规定“将来大皇帝有新恩施及各国，亦应准英人一体均沾，用示平允”，也就是说，英人可以享有今后清朝与其他国家签订的不平等条约中的一切权利。
4．英舰进泊通商口岸。条约规定“凡通商五港口，必有英国官船一只在彼湾泊，以便将货船上水手严行约束，该管事官（即英国领事）亦即借以约束英商及属国商人。”
由此，在“约束”侨民的幌子下，各通商口岸成为英舰自由往来的码头，在此后的中外战争中，各通商口岸成为清朝无法设防的城市。此外，条约对中国的引水权、海关验货权等多有破坏，而条约中关于英人在通商口岸租地建屋的规定，后又被英方曲解为设置“租界”的法律依据。
《虎门条约》的签订，使中国的主权遭到极为严重的破坏，进一步损害了中国的权益，给中国的社会与经济发展带来了灾难性的影响。