《300勇士：帝国崛起》结局中，海上一战后，波斯大军损失惨重，他们暂时退兵休养生息，希腊人战胜了波斯后，雅典城失而复得，他们将薛西斯的王座和栈桥的绳索当成战利品送给德尔菲神庙，并由德尔斐引出新火种，预示着希腊的重生。
影片的背景设定在著名的马拉松战役后，特米斯托克列斯射杀了波斯国王后便被大家奉为希腊英雄，但他此举也为之后的战争埋下祸根，波斯国王去世后，他的儿子薛西斯一世对特米斯托克列斯恨之入骨，一直想杀了他替父亲报仇。
在波斯海军统帅阿特米西亚的煽动下，薛西斯决定出兵进攻希腊，他率领大军与希腊的领袖列奥尼达及其三百勇士在温泉关爆发流传千古的血战，除了陆战外，这次大战的主要场地还发生在海上，阿特米西亚统帅的强大海上部队渐渐逼近了雅典。
在危急关头，特米斯托克列斯临危受命，他带领希腊的勇士们在海上与阿特米西亚所率领的军队展开大战，波斯士兵中很多人都不会游泳，这场战役的结果从一开始便早已注定，最后薛西斯和阿特米西亚全都死在了战场上。